Q:七??焖偬崛×呀庖篗是否適用直接PCR?無(wú)需再抽提DNA?
A:7Sea-Lysis Buffer for Microorganism是為直接PCR(Direct PCR)專(zhuān)門(mén)研制的一種微生物裂解液,可快速抽提DNA,裂解液可直接作為反應模板,進(jìn)行PCR擴增。
Q:適用樣本
A:本裂解液能夠快速裂解大部分細菌、真菌等微生物(包括革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、酵母菌、霉菌等)
Q:反應原理
A:釋放微生物的基因組DNA,得到的微生物裂解液含有大量DNA,可以直接作為反應的模板,用于各種PCR反應。
Q:每次取量
A:取20-40ul Lysis Buffer for Microorganism加入滅菌的離心管中
Q:取樣注意事項
A:用滅菌槍頭或者牙簽挑取單菌落,置于離心管中,攪動(dòng)混勻,注意:
·固體培養菌落:應該多次攪動(dòng)或者抽吸,盡量時(shí)菌落分散成單細胞狀態(tài),塊狀菌落會(huì )影響裂解效果;
·液體培養微生物:取5-10ul酵母或者細菌液體培養物(含基因組103-105),離心,完全吸除培養基,加入20-40ul預處理液,混合均勻
Q:裂解條件
A:離心管于95°熱變形10分鐘或者煮沸3分鐘,然后低俗離心(6000rpm,1min)
Q:裂解后樣品如何保存
A:保存在-20°
Q:PCR反應模板的量
A:取0.5-1ul裂解后的上清液作為PCR反應的模板
·通常取用5%(體積比)的上清作為模板,例如20ul PCR反應體系,取1ul裂解上清作為模板,不同菌體裂解效果會(huì )有差別,初次測試,建議分梯度測試,例如分別取0.5、1和2ul上清做PCR,電泳鑒定產(chǎn)物后,確定最佳上清體積。
·本產(chǎn)品和7Sea Direct PCR系列配合使用,可以達到最佳效果,7Sea Direct PCR為高保真、高反應性的Direct PCR,廣泛用于血液和組織、微生物、植物、細胞等不同樣品的直接PCR
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