Q：貼壁細胞如何處理

A：貼壁細胞去除培養基，用PBS洗后，100μL RIPA裂解液（或其他哺乳動(dòng)物細胞裂解液）中加入1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗。

Q：懸浮細胞如何處理

A：懸浮細胞離心收集后，在離心管中加入100μL RIPA裂解液（或其他哺乳動(dòng)物細胞裂解液）加1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗。

Q：組織樣品如何處理

A：將30~100mg動(dòng)物或植物組織研磨充分后，加入100~200μL裂解液，同時(shí)加入1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗。

Q：大腸桿菌或其他細菌如何處理

A：細菌離心收集后，用裂解液或者研磨破碎后，每100μL加入1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗。

Q：如何稀釋

A：正常建議稀釋比例（終濃度）為1:1000~1:20000，其中時(shí)間、溫度、稀釋比例為影響反應的正面因素。

Q：是否用PBS稀釋

A：是的

Q：能否減少用量

A：如希望減少用量，可酌情提高反應溫度或延長(cháng)時(shí)間

Q：反應輔助因子

A：反應液中必須補加2-5mM Mg2+

Q：反應緩沖液

A：常用生物緩沖液，如TBS、MOPS（pH6-8）等

Q：反應抑制因子

A：在含有以下物質(zhì)，Omnipotent  Nuclease的活性會(huì )降低50%或以上：
                  >150mM 一價(jià)陽(yáng)離子，    >100mM 磷酸鹽
                  >100mM 硫酸銨，        >100mM 鹽酸胍
                  >0.1%SDS，             >1%Triton X-100
                  >1%Tween 20

Q：稀釋后每次用多少量，如何試梯度？起始加多少？

A：看不同的實(shí)驗要求，添加量可以按照1/100-1/10000之間。真核細胞需要量比原核細胞量高，因為真核細胞中核酸含量高真核細胞起始添加量可以按照1/1000的比例添加，原核細胞可以按照1/10000的比例添加；4℃消化DNA添加量比室溫消化DNA添加比例高，因為室溫下Omnipotent  Nuclease酶活力更高。普通CoIP實(shí)驗，蛋白質(zhì)表達實(shí)驗可以適當稍加，對DNA殘留要求高的實(shí)驗，可以按照1/100的比例添加。

Q：怎樣滅活Omnipotent  Nuclease核酸酶？如何去除？

A：采用EDTA螯合金屬離子會(huì )可逆地抑制Omnipotent  Nuclease核酸酶活性，極端條件會(huì )造成不可逆失活，例如：100mM NaOH，70℃處理30min等。Omnipotent  Nuclease核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產(chǎn)物中分離出去，由于這種核酸內切酶及其穩定，建議在終產(chǎn)物要求排除核酸酶的應用中不要使用Omnipotent  Nuclease核酸酶。

Q：儲存條件

A：保存于-20℃。儲存buffer：20mM Tris-HCl pH 8.0， 50 mM NaCl， 2mM MgCl2, 50% glycerin。

Q：PH

A：建議反應體系pH值為6~8

Q：反應中需不需要加Mg2+

A：反應中Mg2+的終濃度為5~10mM

Q：Omnipotent  Nuclease純度

A：＞99%

Q：Omnipotent  Nuclease作用

A：它將核酸完全消化成3-8個(gè)堿基長(cháng)度的5’-單磷酸寡核苷酸。

Q：Omnipotent  Nuclease特點(diǎn)

A：無(wú)蛋白酶、內毒素污染，沒(méi)有標簽，方便下游實(shí)驗操作

Q：酶活單位定義

A：將在30min內，ΔA260降低1.0（相當于完全消化37μg DNA）定義為一個(gè)酶活單位，即1EU。

Q：Omnipotent  Nuclease應用

A：1、蛋白提取時(shí)去除核酸污染：在重組蛋白純化或哺乳動(dòng)物細胞裂解物下游要求粘度較低的情況下，可以利用Omnipotent  Nuclease核酸酶降低樣品粘度以利操作；
     2、有效減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結塊現象；
     3、有利于不可溶性蛋白復性前，高質(zhì)量包涵體制備；
     4、有效去除帶負電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響；
     5、在非常廣泛的條件下（6M urea, 0.1 M Guanidine HCl,  0.4% Triton X100, 0.1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF）, 降解所有形式的（雙鏈，單鏈，線(xiàn)狀，環(huán)狀）DNA和RNA；
     6、去除蛋白質(zhì)產(chǎn)品中的污染，符合FDA關(guān)于核酸污染去除的規程；
     7、本產(chǎn)品可以與多種細胞細菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。

Q：Omnipotent  Nuclease核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容？

A：Omnipotent  Nuclease核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物兼容，但含有EDTA的蛋白酶活性抑制劑。當EDTA濃度>1mM時(shí)，會(huì )抑制核酸酶活性，建議：如果必須加EDTA，按照2倍EDTA濃度補加Mg2+

Q：目的蛋白不溶，需要進(jìn)行變性條件純化。Omnipotent  Nuclease核酸酶能在尿素環(huán)境降解核酸嗎？

A：實(shí)際上，Omnipotent  Nuclease核酸酶在具有尿素（6M）的情況下會(huì )增加活性。在尿素濃度為6M時(shí)，活性會(huì )先增加，再隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)活性降低。尿素濃度為7M時(shí)，Omnipotent  Nuclease核酸酶會(huì )在15min后出現變性并失活。但在酶失活前，多數的核酸已被降解。如果Benzonase核酸酶的原濃度較高時(shí)，會(huì )部分補償7M尿素的影響。

Q：產(chǎn)品的穩定性如何，如果不小心在室溫放置幾天后，酶活性會(huì )受到怎樣的影響？

A：室溫2-3天，對活力影響不大

Q：用全能核酸酶處理表達蛋白的粗提裂解液，來(lái)去除核酸污染，但Taq酶純化過(guò)程中避免不了少量細菌DNA的殘留

A：Taq酶純化時(shí)，除了用Omnipotent  Nuclease消化，后期還需要離子交換樹(shù)脂和分子篩或者透析方法去除DNA殘留

Q：反應條件

A：Omnipotent  Nuclease 核酸酶的活性需要1-2mM Mg2+.而在單價(jià)陽(yáng)離子濃度>50%，磷酸濃度>20mM，硫酸銨濃度>25mM等情況下，Omnipotent  Nuclease 的活性會(huì )降低50%

Q：Omnipotent  Nuclease 核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物可以兼容嗎

A：Omnipotent  Nuclease 核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是可以兼容，但是對于含有EDTA配方的蛋白酶抑制劑混合物要特別小心，EDTA濃度大于1mM時(shí)會(huì )抑制Omnipotent  Nuclease 的活性。

Q：Omnipotent  Nuclease與超聲的作用區別

A：超聲的確可以破碎細胞或者組織，但是和Omnipotent  Nuclease有不同之處！

   1.Omnipotent  Nuclease可以將DNA和RNA消化成3-8個(gè)堿基的單磷核苷酸，而超聲只能打碎為大片段，所以處理完樣品很多還是很粘稠，不易吸取上樣；所以在COIP實(shí)驗時(shí)，加入Omnipotent  Nuclease可以降低背景。

   2.如果目的蛋白被核酸包裹，只能使用Omnipotent  Nuclease將核酸消化，才能將蛋白釋放；

   3.超聲就是在冰上操作，也會(huì )產(chǎn)熱，易降解熱敏感的蛋白；Omnipotent  Nuclease可以在低溫下消化，不會(huì )降解目的蛋白。

Q：哪些實(shí)驗可能用得到Omnipotent  Nuclease，在哪一步驟加Omnipotent  Nuclease

A：例如：his蛋白純化，IP實(shí)驗。細胞裂解時(shí)

Q:樣本黏度高，不易過(guò)柱

A:細胞破碎后由于含有大量DNA和RNA，黏度很高，過(guò)柱不容易。解決的方法有兩種：1是用核酸酶。2也可以用高壓勻漿。都可以達到降低黏度的作用。
差別在于：用核酸酶，DNA和RNA可以絳解成小片段或單核苷酸；高壓勻漿用機械剪切力將DNA和RNA處理成較大的片斷。
超聲波處理在處理小量表達的時(shí)候問(wèn)題不大，但做大量蛋白表達的時(shí)候有困難。
   核酸酶的另外一個(gè)重要應用是：若你的目的蛋白是DNA結合蛋白，那么純化的時(shí)候最好先用核酸酶處理。  

Q:我的目的蛋白不溶，需要進(jìn)行變性條件純化。Omnipotent  Nuclease核酸酶能在尿素環(huán)境消化核酸嗎？

A:實(shí)際上Omnipotent  Nuclease核酸酶在有尿素（濃度可達6M）的情況下會(huì )增加活性。在尿素濃度為6M時(shí)活性先增加，隨著(zhù)時(shí)間延長(cháng)活性又有降低。尿素為7M時(shí)，Omnipotent  Nuclease核酸酶15分鐘后出現變性并失活。但是在酶失活前多數核酸已經(jīng)降解了。如果Omnipotent  Nuclease核酸酶的原濃度較高時(shí)會(huì )部分補償7M尿素的影響。

Q:說(shuō)明書(shū)中建議100ul添加1-5ul 全能核酸酶Omnipotent  Nuclease，而最下面的tips中又建議1:1000-20000稀釋?zhuān)敲瓷弦痪?-5ul是指稀釋前的量還是稀釋后？

A:說(shuō)明書(shū)上的三個(gè)例子都是從上游實(shí)驗開(kāi)始 就使用全能核酸酶 其核酸殘留較多，所以需要用量較多
   如果從下游實(shí)驗開(kāi)始 其中核酸殘留本身已經(jīng)比較少 則需要的全能核酸酶的用量 按照1:1000--1:20000的比例添加即可------這也是一般工業(yè)級的使用方法
   科研實(shí)驗的話(huà) 建議按照說(shuō)明書(shū)上面的建議 進(jìn)行操作 效果更佳

Q：我的樣本大概是100mL菌液，推薦買(mǎi)多少Omnipotent  Nuclease核酸酶？

A：需要根據重懸菌體所需裂解液的體積來(lái)確定需要酶的量。若普通蛋白純化，則需要濃度為25U/mL；核蛋白則需要100U/mL；病毒表達蛋白純化需要濃度為12.5U/mL；疫苗產(chǎn)品需要量為0.9~1.1U/mL。