Q:基質(zhì)

A:4%交聯(lián)瓊脂糖凝膠

Q:配基

A:重組Protein A

Q:配基密度

A:6mg重組蛋白A/ml

Q:動(dòng)態(tài)吸附載量

A:60mg 人IgG/ml

Q:顆粒大小

A:50-160um

Q:推薦流速

A:50-300cm/h

Q:PH范圍

A:2--13

Q:使用溫度

A:4°或者常溫

Q:Protein A Sepharose層析操作步驟

A:裝柱、平衡、上樣、洗滌、洗脫、再生

Q:如何平衡

A:用5-10柱體積的平衡緩沖液（20mM PBS，PH7.4）平衡層析柱，至流出液電導和PH與平衡液一致。

Q:某些載量較少抗體如何純化

A:可以適當調高平衡緩沖液中的鹽濃度（最高達3M）和PH值（最高達8.2），來(lái)增強抗體與介質(zhì)的吸附結合力。但有時(shí)過(guò)高的PH值會(huì )增加雜蛋白的吸附，因此應用時(shí)需根據實(shí)際情況適當調節。上述的緩沖液在使用前先用0.45um濾膜過(guò)濾。

Q:上樣

A:樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配置；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋?zhuān)蝗绻蠘芋w積過(guò)大，可以采取調節上樣液PH和鹽濃度的方式使樣品的PH和電導與平衡液接近。為了避免堵塞層析柱，樣品應經(jīng)離心或0.45um濾膜過(guò)濾處理。進(jìn)料量根據介質(zhì)的載量和料液中目標蛋白的含量計算。

Q:洗滌

A:上樣完畢后繼續用平衡緩沖液洗至基線(xiàn)

Q:洗脫

A:用洗脫緩沖液洗脫（0.1M檸檬酸pH3.0；或0.1M甘氨酸pH3.0；具體洗脫條件與抗體的結合強度和穩定性密切相關(guān)，效果不好時(shí)應進(jìn)行洗脫緩沖液的優(yōu)化），收集洗脫液。洗脫后，應立刻用堿性緩沖液（如1M Tris-HCl，pH9.0）將收集到的抗體溶液中和到抗體穩定的pH，避免抗體失活，維持抗體的生物活性。

Q:在位清洗

A:介質(zhì)使用后，需要對介質(zhì)進(jìn)行在位清洗。
用0.1M NaOH清洗柱子3-5柱體積，并用5~10柱體積的純水沖洗，然后用緩沖液吸到中性即可重復使用。如不立即重復使用，把柱子保存在20%乙醇的PBS中。

Q:如何再生

A:該重組Protein A對堿耐受，可以用0.1M NaOH洗滌再生

Q:Protein A可以重復用多少次

A:50次以上

Q:結合力不高，樣本為腹水

A:1、假定是單抗腹水，建議按照以下方法處理：硫酸銨沉淀（注意調節pH為7.0，這個(gè)很重要，我們的柱子pH5就可以洗脫，無(wú)需中和，防止變性）；上柱；然后洗脫；最后100mM NaOH重生。
   2、proteinA對某些單抗亞型的親和能力低，不如protein L，我們自己已經(jīng)純化了100多株單抗，其中30%左右的單抗proteinA不掛或者很低，但是proteinL表現很好。
建議，同步測試protieinL。

   另外，我們的proteinA是新型配基，載量測定是用人血清測試，每批次都在30mg/mL 以上，這一點(diǎn)，客戶(hù)都可以自測，它另外具有的突出優(yōu)勢是：pH4.5就可以洗脫，防止蛋白變性，便于下游處理（例如50mM 醋酸鈉緩沖液，pH4.5.）

Q:是否可除血清中血細胞雜質(zhì)

A:可清楚血清中血細胞雜質(zhì)。同時(shí)推薦樣品在純化前高速離心，去除大部分固體雜質(zhì)。

Q:做小鼠載量分別是多少

A:亞型不同，鼠的載量是人載量的20%-50%左右，做小鼠建議用Protein G，這個(gè)是通用的

Q:純化不同動(dòng)物、不同亞型抗體時(shí)所用平衡緩沖液是否一樣？若不一樣配方？

A:不同動(dòng)物、抗體亞型用的緩沖液是一樣的，只是不同的動(dòng)物來(lái)源、不同的抗體亞型載量會(huì )不一樣。

Q:1ml大約可以提純多少的血清？需要粗提純嗎？還是血清就可以？

A:直接血清就可以，一般人源的20mg/ml的抗體

Q:我現在有幾ml鼠血清，有igg抗體，需要純化，然后需要用純化的igg純化抗原，并且最后抗體、抗原需要分別保存用于后續實(shí)驗，需要的是我們哪個(gè)產(chǎn)品

A:1、先用Protein A純化出抗體，預計就只要1ml左右的量，估計鼠抗濃度不高，1ml就足夠了。純化出抗體后單獨保存。
   2、再將抗體與Protein A結合，用一種交聯(lián)試劑與抗原交聯(lián)在一起得到純化抗原。具體的交聯(lián)試劑需要您再去查查

Q:除了人IgG抗體，哪些動(dòng)物哪些抗體曾做過(guò)實(shí)驗？載量多少？

A:除了人IgG、我們還純化過(guò)羊、小鼠、兔子的抗體。不同的動(dòng)物，不用的亞型載量有區別。