Q:Protein L的結合范圍

A:可以結合所有的Ig類(lèi)（IgG，IgM，IgA，IgE和IgD），也可以結合單鏈抗體和Fab片段。

Q:適用樣本

A:腹水、血清和培養液等樣品中得到高純度的抗體

Q:基質(zhì)

A:4%交聯(lián)瓊脂糖凝膠

Q:配基

A:重組protein L

Q:配基密度

A:5mg重組蛋白L/ml

Q:動(dòng)態(tài)吸附載量

A:5-10mg人IgG/ml

Q:顆粒大小

A:50-160um

Q:推薦流速

A:50-300cm/h

Q:pH范圍

A:2~11

Q:使用溫度

A:4°或常溫

Q:保存液體

A:20%乙醇

Q:哪些情況下推薦使用Protein L

A:·protein A無(wú)法結合的單克隆抗體純化
   ·輕鏈為kappa單抗或者多抗血清純化
   ·用牛血清培養基培養雜交瘤細胞純化抗體時(shí)，避免牛血清中抗體污染（牛血清中主要是lambda鏈抗體，不結合）

Q:如何平衡

A:用5-10柱體積的平衡緩沖液（20mM PBS,PH7.4）平衡層析柱，至流出液電導和pH與平衡液一致

Q:對于某些載量較少抗體的純化，如何平衡

A:對于某些載量較少抗體的純化，可以適當調高平衡緩沖液中的鹽濃度（最高達3M）和pH值（最高達8.2），來(lái)增強抗體與介質(zhì)的吸附結合力。但有時(shí)過(guò)高的PH值會(huì )增加雜蛋白的吸附，因此應用時(shí)需根據實(shí)際情況適當調節。上述的緩沖液在使用前先用0.45um濾膜過(guò)濾。

Q:如何上樣

A:樣品緩沖液應盡可能與平衡液一致。固體樣品可用平衡液溶解配置；低濃度樣品溶液可用平衡液透析；高濃度樣品溶液可用平衡液稀釋?zhuān)蝗绻蠘芋w積過(guò)大，可以采取調節上樣液PH和鹽濃度的方式使樣品的PH和電導與平衡液接近。進(jìn)料量根據介質(zhì)的載量和料液中目標蛋白的含量計算。

Q:上樣后出現堵柱問(wèn)題

A:為了避免堵塞層析柱，樣品應經(jīng)離心或0.45um濾膜過(guò)濾處理。

Q:如何洗滌

A:上樣完畢后繼續用平衡緩沖液洗至基線(xiàn)（5-10個(gè)柱體積）。

Q:如何洗脫

A:用3-5個(gè)柱體積洗脫緩沖液洗脫（0.1M檸檬酸PH2.5；或0.1M甘氨酸PH2.5；具體洗脫條件與抗體的結合強度和穩定性密切相關(guān)，效果不好時(shí)應進(jìn)行洗脫緩沖液的優(yōu)化）收集洗脫液。洗脫后，應立即用堿性緩沖液（如1M Tris-HCl,PH9.0）將收集到的抗體溶液中和到抗體穩定的PH，避免抗體失活。

Q:如何在位清洗

A:介質(zhì)使用后，需要對介質(zhì)進(jìn)行在位清洗。
用50mM NaOH清洗柱子3-5柱體積，并立即用5-10柱體積的純水沖洗，然后用緩沖液洗到中性即可重復使用。