Q:Prescission Protease可識別哪些序列

A:PP酶特異識別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln/Gly-Pro中的Gln和Gly殘基而進(jìn)行切割，讀物的識別和切割不僅依賴(lài)于融合蛋白的一級結構還依賴(lài)于融合蛋白的二級和三級結構。

Q:切割哪種標簽

A:PP酶可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達出的帶有酶底物識別多肽序列融合蛋白的GST標簽進(jìn)行分離。

Q:酶活性單位定義

A:在5℃條件下反應16小時(shí)，能夠切割100ug的GST標簽的融合蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。

Q:Prescission Protease儲存液成分

A:25mM Tris-HCl，PH 8.0
   150mM NaCl
   1mM EDTA
   5mM DTT
   50%(v/v）Glycerin

Q:10*Cleavage Buffer成分

A:500mM Tris-HCl，PH 7.0
   1.5M NaCl
   10mM EDTA
   10mM DTT

Q:推薦反應體系

A:

Q:參考反應時(shí)間

A:4℃反應15-16小時(shí)

Q:蛋白純度

A:＞95%，as determined by SDS-PAGE

Q:儲存條件

A:長(cháng)期儲存于-80℃，可保存2年；或小量分裝后保存于-20℃，可保存6個(gè)月，避免反復凍融。10*Cleavage Buffer置于-20℃保存。

Q:PP酶與腸激酶/凝血酶的區別

A:識別位點(diǎn)不一樣，反應buffer不一樣

Q:酶活、切割效率如何

A:效率都很好。

Q:實(shí)驗后發(fā)現融合蛋白只切了一小部分，大部分未被切除，原因？解決方法

A:適當提高切割反應的溫度，時(shí)間，適當增加酶量。