Q:來(lái)源
A:煙草蝕紋病毒蛋白酶;Tobacco etch virus protease,來(lái)源于煙草蝕紋病毒(TEV)Nla的重組蛋白酶,大腸桿菌重組表達。
Q:TEV protease用途
A:可以用來(lái)切除純化后融合蛋白的親和標簽
Q:識別位點(diǎn)
A:TEV蛋白酶具有很強的位點(diǎn)特異性,能夠識別EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly),最普通的是ENLYFQG,其切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間。
Q:如何去除
A:該酶帶有His-sumo Tag經(jīng)6*His標簽純化,剪切反應完畢后可通過(guò)Ni-NTA(產(chǎn)品貨號:PAN001)去除。
Q:酶活性單位定義
A:在1*TEV Buffer(50mM Tris-HCL,PH 8.0,0.5mM MEDTA,1mM DTT)中,30℃條件下反應1小時(shí),能夠切割3ug的反應底物達85%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。
Q:溶液組分
A:
TEV protease儲存液 | 10*cleavage Buffer |
25mM Tris-HCL,PH8.0 | 500mM Tris-HCL,PH8.0 |
150mM NaCL | 5mM EDTA |
1mM EDTA | 10mM DTT |
Q:推薦反應體系
A:
反應物組成 | 體積 |
融合蛋白 | 50ug |
TEV protease | 2ul(10U/ul) |
10*TEV Buffer | 10ul |
ddH2O | 至100ul |
Q:活性測試
A:待測融合蛋白100ug,加入TEV protease 2ul,4℃反應16小時(shí),取酶切前后樣品SDS-PAGE檢測,>90%融合蛋白被切割。
Q:酶純度
A:>90%
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