Q:逆轉錄酶反應原理

A:莫洛尼氏鼠白血病毒逆轉錄酶（M-MLV RT）能以單鏈RNA或DNA為模板，在引物的引發(fā)下合成與模板互補的DNA鏈。

Q:來(lái)源

A:重組蛋白質(zhì)（E.coli），通過(guò)基因重組技術(shù)克隆表達的缺失突變型Rnase H-的M-MLV反轉錄酶，Rnase H活性缺失，延伸能力強，可用于較長(cháng)的cDNA合成以及高比例的全長(cháng)cDNA文庫的構建等

Q:活力單位定義

A:以Poly（A）為模板，Oligo（dT）為引物，，在37℃條件下，10min內催化摻入1nmol dTTP所需酶量定義為1個(gè)活性單位（U）

Q:應用

A:用于1st-Strand cDNA的合成，RT-PCT反應以及Real Time RT-PCR反應等。

Q:模板RNA/引物混合液的配置

A:

Q:混合液配置后處理

A:65℃保溫5min后迅速在冰上冷卻2min

Q:反應體系

A:

Q:反應溫度和反應時(shí)間

A:42℃孵育1小時(shí)；
   以Random Primers作為反轉錄引物時(shí)應先于25℃，反應10min，然后再于42℃條件孵育1小時(shí)。

Q:終止反應

A:70℃加熱15min終止反應。

Q:終產(chǎn)物

A:cDNA溶液可直接用于2nd-Strand cDNA的合成或PCR擴增。

Q:Rnase H—缺失與普通MMLV的區別

A:H型缺失的可用于較長(cháng)cDNA合成及高比例的全長(cháng)cDNA文庫構建