Q:T4 DNA Ligase用途

A:常用于催化雙鏈DNA平末端或互補粘性末端之間的連接反應，也能催化雙鏈RNA 5’-磷酸末端和3’-羥基末端間的連接。還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA雜交雙鏈中的單鏈切口。

Q:來(lái)源

A:重組蛋白質(zhì)（E.coli）

Q:活力單位定義

A:1個(gè)Weiss活性單位是指在A(yíng)TP-Ppi交換反應中，37℃、20分鐘內將1nmol【32 PPi】轉換為Norit可吸收形式所需的酶量。1個(gè)Weiss單位相當于約200個(gè)粘性末端連接單位（CEU）
   1個(gè)粘性末端連接單位：20ul反應體系（50mM Tris-HCL PH7.5，10mM MgCL2，10mM DTT，1mM ATP，25ug/ml BSA，0.12uM（30ug/ml）的5’DNA末端）中，在16℃、30分鐘內50%連接HindIII酶切的Lambda DNA產(chǎn)物所需要的酶量。

Q:純度

A:＞95%，沒(méi)有檢測到其他蛋白酶和核酸酶活力。

Q:應用

A:DNA平端、粘端連接或者DNA環(huán)化。

Q:使用示例

A:以10ul連接體系示例，在微量離心管中加入以下各種成分
  

Q:關(guān)于Mg2+

A:T4 DNA連接酶要求Mg2+，因此螯合Mg2+的EDTA的存在會(huì )阻礙反應

Q:NaCL、KCL濃度

A:NaCL或KCL濃度大于200mM時(shí)強烈抑制T4 DNA Ligase

Q:T4 DNA連接酶失活

A:65℃孵育10min或70℃孵育5min可以導致T4 DNA連接酶失活

Q:可以通過(guò)何種方式增加連接效率

A:聚乙二醇（PEG）極大地增加平末端連接效率

Q:是否可以通過(guò)加入終濃度為5% PEG Solution來(lái)提高平末端的連接效率？

A:可以

Q:粘端連接和平端連接是否反應時(shí)間不同？

A:時(shí)間相同