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KOD高保真酶

Q:保真性

A:保真性能比普通Taq聚合酶高80倍


Q:延伸速率

A:在推薦的條件下大于每分鐘2kb


Q:活性定義

A:嗜熱菌DNA Polymerase的活性單位定義為:在推薦的緩沖反應體系中,以大馬哈魚(yú)精DNA為模板,68° 30分鐘內合成10nmol核酸所需要的酶量為1活性單位


Q:質(zhì)量控制

A:經(jīng)酶切實(shí)驗檢測無(wú)外源核酸酶污染,PCR方法未檢測到宿主DNA殘留,-20°存放一年,無(wú)明顯活性喪失。


Q:貯存溶液

A:50mM Tris-HCL(PH 7.6),50mM KCL,1mM DTT,0.1mM EDTA,50%(v/v) glycerol


Q:dNTP注意事項

A:對于高保真酶,dNTP中雜質(zhì)強烈抑制聚合酶反應,請使用高質(zhì)量的dNTP


Q:引物長(cháng)度

A:引物的適當長(cháng)度為20-35bp;過(guò)長(cháng)或者過(guò)短,需要優(yōu)化退火溫度;


Q:GC含量高

A:GC含量高的情況下,請使用GC buffer,對保真性沒(méi)有影響;擴增基因組或GC含量較高時(shí),建議98°變性


Q:可參考PCR體系

A:

KOD 0.5-1ul
2xKOD buffer 10ul
dNTP(10mM each) 0.5ul
Primers(10uM) 1ul(各0.5ul)
無(wú)菌H2O Up to 20ul

Q:可參考PCR程序(根據實(shí)際反應條件摸索優(yōu)化)

A:

95℃或98℃  4min 1Cycle
95℃或98℃  20s 普通質(zhì)粒擴增(28 Cycles)
質(zhì)粒點(diǎn)突變(20 Cycles)
cDNA模板擴增(28-35 Cycles)
末端補平(5 Cycles)
52°(Tm-5℃)  20s
68℃  1.5kb/min
68℃  3min (1 Cycle)


Q:組分中是否含有Mg2+

A:buffer中含mg離子


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