Q:模板制備需要多久

A:無(wú)需DNA提取，樣品處理快捷，可在5-20min內完成模板制備

Q:這種直接PCR試劑盒，擴增產(chǎn)物可以做哪些實(shí)驗

A:PCR的產(chǎn)物可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和EB染色進(jìn)行分析，進(jìn)行下游的常規操作，例如限制性酶切、DNA測序、dHPLC分析等

Q:樣品預處理

A:把土壤樣品加入5-10倍左右體積的裂解液中，煮沸2-5min（或者75℃加熱20min，每隔10min劇烈震蕩一次，然后高速離心20min（12000g），小心取上清并移入樣品管中，從制備好的上清中取1-2.5ul（2-5%總體反應體積）含有DNA的裂解液加入PCR反應體系作為模板，剩余樣品可以在-20℃儲存。

Q:反應體系

A:以40ul體系示例（20-50ul/reaction），在微量離心管中加入以下各種成分

土壤抽提液	1-2.5ul
聚合酶	1-2ul
5*PCR Buffer	8ul
dNTP（10mM）	0.8ul
Primers	1-2ul（0.25-1uM終濃度）
ddH2O	UP to 40ul

Q:PCR反應參數設置

A:依據擴增產(chǎn)物而定，以2kb的擴增產(chǎn)物為例：94℃ 4 min，30 cycles（94℃ 30 sec，55℃ 30 sec，72℃ 1 min），72℃ 5 min，4℃保溫。

Q:我的片段大?。?kb

A:擴增1kb以下片段，5sec延伸即可；也可采用兩步擴增法（設計引物長(cháng)度22-25bp，68℃退火延伸）