Q:懸浮細胞樣品制備
A:對于懸浮細胞，在進(jìn)行完細胞凋亡刺激后，1000g 離心5 分鐘
Q:貼壁細胞樣品制備
A:對于貼壁細胞，把細胞培養液吸出至一合適離心管內（內含已經(jīng)懸浮的發(fā)生凋亡或壞死的細胞），PBS洗滌貼壁細胞一次，加入適量胰酶消化細胞。室溫孵育至輕輕吹打可以使細胞吹打下來(lái)時(shí)，吸除胰酶，避免胰酶消化不夠或消化過(guò)度。加入收集的細胞培養液，輕輕吹打均勻，轉移到離心管內，500g 離心5 分鐘
Q:中晚期凋亡細胞是否可以丟棄
A:中晚期凋亡細胞因失去貼壁能力而懸浮于上清中，此部分細胞對于結果是否顯著(zhù)具有重大影響，不可任意丟棄，需離心收集后一起檢測才能全面反映出細胞凋亡的整體情況
Q:Annexin V 凋亡檢測試劑盒適用樣本
A:哺乳動(dòng)物細胞
Q:昆蟲(chóng)細胞是否可以用這種凋亡檢測方法
A：可以
Q：胰酶消化時(shí)的細胞處理
A：胰酶消化時(shí)細胞處理需要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞
Q：如何重懸細胞
A：棄上清，用1ml PBS 輕輕重懸細胞
Q：細胞數量有無(wú)要求
A：細胞數量不少于105
Q：細胞計數后直接收集細胞嗎
A：500g 離心5 分鐘，收集細胞
Q：1000g離心5分鐘，是否可以室溫
A：4℃
Q：巨噬細胞的凋亡實(shí)驗是否可用？動(dòng)物細胞（如兔腫瘤細胞）/植物細胞及其他細胞是否都可用？
A：巨噬細胞、動(dòng)物細胞都可以用annexinV-FITC檢測凋亡。植物細胞。真菌細胞等具有細胞壁的細胞不能用annexinV-FITC檢測。
Q：FITC染不上色可能是什么原因導致？如何解決
A：annexinV-FITC染不上色的主要原因沒(méi)有完全漂洗干凈，細胞培養基中的螯合物質(zhì)螯合了Ca2+,影響了annexinV和PS的結合?；蛘卟煌募毎?，摸索一下實(shí)驗條件，annexinV-FITC加5-10uL每樣本。
Q：將組織消化成細胞，如何判定消化好了？
A：組織消化成單細胞判定標準是顯微鏡下成單細胞狀態(tài)或者大部分為單細胞狀態(tài)。流式細胞儀檢測時(shí)，設對照組去掉多細胞的團塊。
Q：凋亡前期的細胞群與正常細胞群分離不是很清晰，如何解決？
A：凋亡前期和正常細胞分離不清晰，可能與樣本有關(guān)，可重復實(shí)驗看看結果。同時(shí)設置合適的門(mén)限，數據也是可信的。
Q：胰酶中是否可以含EDTA？
A：不要含有，如果有的話(huà)，用我們的Binding buffer洗至少一遍。
Q：為何要用PBS洗滌細胞
A：PBS 洗滌細胞，洗掉殘留的胰酶
Q：殘留的胰酶是否一定要洗凈
A：殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，最終導致染色失敗。
Q：buffer的使用量
A：加入400μl 1×Binding Buffer 輕輕重懸細胞
Q：如消化液中含有EDTA，是否需要處理
A：如果消化液中含有EDTA則需加入400ul 1*binding buffer洗滌一次。
Q：每次加入多少Annexin V FITC
A：加入5μl Annexin V-FITC，輕輕混勻，室溫避光孵育15 分鐘。
Q：每次加入多少PI
A：加入10μl PI 染色液，輕輕混勻，冰浴避光放置5 分鐘。
Q：Annexin V-FITC和PI是否可以同時(shí)孵育？
A：可以
Q：孵育多久上流式細胞儀檢測
A：在30 分鐘內進(jìn)行流式細胞儀檢測
Q：會(huì )顯什么顏色
A：Annexin V-FITC 為綠色熒光，PI 為紅色熒光。
Q：如何用熒光顯微鏡觀(guān)察
A：如果用熒光顯微鏡下檢測，則1000g 離心5 分鐘，收集細胞，用50-100μl 1×Binding Buffer輕輕重懸細胞，涂片后，熒光顯微鏡下觀(guān)察。
Q：如果用熒光顯微鏡分析，離心和重懸是在第幾步之后進(jìn)行的？
A：建議最好不要用顯微鏡分析，最好是用流式細胞儀，在加入FITC后5-10分鐘就可以進(jìn)行分析了。
Q：補償怎么做？
A：補償信息內容較多，如需文本，詳詢(xún)技術(shù)，我們會(huì )通過(guò)郵件發(fā)送給您。
Q：如何用流式細胞儀分析
A：流式細胞儀激發(fā)光采用激發(fā)波長(cháng)488nm，發(fā)射波長(cháng)530 nm 檢測FITC 和>575 nm 檢測PI。Annexin V-FITC 的綠色熒光通過(guò)FITC 通道（FL1）檢測；PI 紅色熒光通過(guò)PI 通道（FL3/FL2 建議使用FL3）檢測。
Q：用流式細胞儀分析后最后的結果是什么樣
A：細胞應可分成三個(gè)亞群：正?；罴毎麅H有很低的熒光強度，凋亡細胞有較強的綠色熒光，壞死細胞有綠色和紅色熒光雙重染色。
Q：保存
A：4℃保存，Annexin V-FITC、PI 染色液需避光保存，半年有效。若長(cháng)期保存，可以把PI 染色液適當分裝后-20℃保存，Annexin V-FITC 結合液可以直接-20℃保存。
Q：所需試劑及儀器
A：1. PBS
2. 蒸餾水或去離子水
3. 水平離心機
4. 流式細胞儀或熒光顯微鏡
5. 移液器
Q：Annexin V FITC/PI雙染法凋亡流式細胞凋亡檢測試劑盒可以檢測哪些種類(lèi)細胞
A：該試劑盒只能檢測活細胞，而不能用于切片、擦刮、固定或浸潤細胞樣品的檢測
Q：染色后如果時(shí)間比較長(cháng)了會(huì )不會(huì )影響結果
A：細胞凋亡是一種持續變化的動(dòng)態(tài)過(guò)程，選擇合適的誘導時(shí)間對觀(guān)察凋亡比較重要。染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
Q：如果有細菌污染，有無(wú)影響
A：如果有細菌或真菌污染，會(huì )嚴重影響檢測效果。
Q：有殘留胰酶
A：PBS 洗滌細胞，洗掉殘留的胰酶，否則殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC，最終導致染色失敗。
Q：觀(guān)察時(shí)間在多久之內合適
A：熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
Q：含有血小板的血液樣品是否需要處理
A：檢測血液樣品時(shí)，如果含有血小板，請使用含有EDTA 的緩沖劑并200×g 離心洗去血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V 結合，從而干擾實(shí)驗結果。
Q：血液樣品，用了EDTA的緩沖劑，有什么要注意的嗎？
A：離心去血小板
Q：試劑盒使用過(guò)程中對光有無(wú)要求
A：Annexin V-FITC 和PI 是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光
Q：種屬是豬，如何做同型對照
A：我們目前的產(chǎn)品不需要同型對照
Q：加了PI之后，不是在冰浴的情況下放置的，有無(wú)影響？感覺(jué)實(shí)驗結果不是很漂亮，是和這個(gè)有關(guān)嗎？
A：建議冰浴。如果不冰浴會(huì )造成假陽(yáng)性。
Q：是否可做細胞周期檢測，是不是關(guān)掉一個(gè)通道就可以用另一通道測細胞周期
A：建議不要做細胞周期實(shí)驗，Annexin V是會(huì )影響PI的度數的，即便關(guān)閉了一個(gè)通道，影響依然存在，如果說(shuō)只用我們AV FITC/PI試劑盒中的PI也是不行的，PI的濃度不夠，沒(méi)有專(zhuān)門(mén)的細胞周期試劑盒中的PI濃度高，做出來(lái)結果會(huì )不好
Q：是否可用于細胞爬片
A：可以做，一般很少這樣做，都是用流式的方法
Q：定量檢測凋亡率比較成熟的是哪些實(shí)驗方法？要能區分正常細胞，凋亡細胞和死亡細胞的。
A：annxinV-FITC/PI雙染可以區分正常細胞，凋亡早期細胞，凋亡晚期細胞。
Q：細胞凋亡實(shí)驗之前用的是EGFP PI雙染的，現在用的FITC PI雙染檢測細胞凋亡的試劑盒。流式細胞儀檢測的時(shí)候，兩個(gè)對比圖的十字門(mén)刻度位置是要一樣的嗎？?jì)蓚€(gè)圖刻度不一樣的。這樣對比科學(xué)的嗎？
A：不同熒光素之間沒(méi)有可比性，而且其電壓、補償不一定都一樣，沒(méi)有比較意義；同一次實(shí)驗中，只要樣品和同型對照或陰性對照的畫(huà)門(mén)一致就行
Q:是否需要設置單陽(yáng)管
A:推薦設置
Q:如何設置單陽(yáng)管
A:AnnxinV-FITC/PI雙染法測細胞凋亡。推薦設置單管陽(yáng)性對照用于熒光補償，即樣本經(jīng)過(guò)同樣的處理方式，但是單獨用AnnexinV-FITC或PI單染細胞，然后上流式細胞儀，根據系統給出的數值設置熒光補償參數。
Q:需要設置陰性對照嗎
A:不需要
Q:細胞很快下沉
A:細胞下沉與試劑本身無(wú)關(guān)，建議確認：1、細胞種類(lèi)；2、是否消化成單細胞
