Q:反應原理

A:基因組DNA雙鏈變性解鏈后，在亞硫酸鹽的作用下序列中的C→U，CG→UG，而5-甲基胞嘧啶則不受影響，CG→CG。通過(guò)各種實(shí)驗技術(shù)，如MSP（Methylation Specific PCR），BSP（bisulfate-sequencing PCR），HRM（High Resolution Melting），焦磷酸測序（Pyrosequencing）和甲基化芯片等技術(shù)，可檢測出這種差異，從而確定基因組CpG島甲基化狀態(tài)。

Q:修飾時(shí)間是多久

A:本制品可將DNA變性的同時(shí)進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉化操作，整個(gè)操作過(guò)程的時(shí)間被縮短到3小時(shí)。

Q:可以轉換多少DNA

A:試劑盒每次轉換反應可以轉換1ng-1ug的DNA

Q:推薦DNA量

A:為了達到最優(yōu)的轉換效果，最好是限制在0.2ug-0.8ug的范圍，能將所有非甲基化胞嘧啶轉換成尿嘧啶，推薦使用500ng的DNA。

Q:轉換率

A:＞99.9%

Q:MC1 MIX（M-Conversion Reagent）制備

A:試劑盒中所提供的MC1 MIX是固體混合物，并且一定要在首次使用前制備好。方法：添加900ul ddH2O或者去離子水，300ul的MC2 Buffer和100ul的MC3 Buffer到一管MC1中。在室溫下顛倒混勻2分鐘或在搖床上搖動(dòng)溶解5分鐘。

Q:MC1溶液的保存

A:在使用之前將MC1溶液在室溫（20℃-30℃）下避光保存。每管的MC1是針對10次DNA處理設計的。為了得到較好的結果，MC1應當在制備后立即使用。如果不立刻使用的話(huà)，MC1溶液可以在-20℃存儲1周。而且在使用之前存儲的MC1溶液一定要在室溫下解凍并且通過(guò)振蕩或顛倒混勻2分鐘。MC1對光很敏感，所以要盡量減少在光下的暴露。

Q:M-WASH BUFFER的制備

A:添加22ml（對于100次的應為44ml）95%或無(wú)水乙醇到M-WASH BUFFER中來(lái)制備最終可以使用的M-WASH BUFFER

Q:最佳修飾量

A:推薦最佳修飾量為400-800ng

Q:每次加入的MC1溶液量

A:PCR管中添加150ul的MC1（M-Conversion Reagent）到每20ul DNA樣品中。

Q:DNA樣品量不足20ul

A:如果DNA樣品的體積小于20ul，則用水來(lái)彌補差量。

Q:樣品管暫時(shí)不實(shí)驗，是否可以保存

A:4℃下存儲（最多20小時(shí)）。

Q:洗脫后的DNA如何保存

A:DNA可立刻進(jìn)行分析或儲存在低于-20℃下以備以后使用。

Q:PCR每次使用多少洗脫的DNA作為模板

A:我們建議您每次PCR（25ul體系）使用4ul洗脫的DNA作為模板。