Q:這種直接PCR試劑盒，擴增產(chǎn)物可以做哪些實(shí)驗

A:PCR的產(chǎn)物可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和EB染色進(jìn)行分析，進(jìn)行下游的常規操作，例如限制性酶切、DNA測序、dHPLC分析等

Q:適用哪些樣本

A:轉基因食品

Q:樣品處理需要多久

A:5-20min內完成模板制備

Q:操作流程、實(shí)驗步驟等與常規檢測方法有多少區別

A:除了無(wú)需進(jìn)行DNA抽提，其他手段兼容。

Q:抽提DNA后是否需對抽提液做其他處理

A:提取的DNA可以馬上用于PCR反映，不需要去除其他蛋白、RNA或者次生代謝產(chǎn)物

Q:樣品預處理

A:食品呈現液態(tài)、油態(tài)、粉狀和顆?；驂K狀，未加工或深加工過(guò)，處理方法也因此有所不同。未經(jīng)加工的食品原料預處理相對簡(jiǎn)單，深加工的食品雜質(zhì)多，DNA普遍降解，要盡量通過(guò)洗滌步驟把雜質(zhì)去除。
   1、液態(tài)或漿狀：
以醬油為例，取10ml醬油，加入20ml的-20℃預冷的無(wú)水乙醇，混勻后靜置5min，12000g離心5min。棄上清，加入10-20倍體積的50mM Tris（PH 8.0-9.0）（自配），漩渦震蕩30s，充分懸浮后，12000g離心5min。棄上清，對樣品裂解處理，方法見(jiàn)樣品裂解處理步驟。
   注意：盡量通過(guò)50mM Tris充分洗去鹽分和色素，如有必要洗滌兩次。
   其他樣品如豆漿，可以省略加入無(wú)水酒精的沉淀步驟。
   加入裂解液后，充分研磨可以明顯增加DNA的釋放。
   2、油態(tài)：
各種食用油中，由于加入方式不同，DNA含量差別加大，以壓榨法生產(chǎn)的油為例，通過(guò)高速離心（15000g，10min），100ml油可以得到0.5-1g左右的沉淀，加入20倍體積的50mM Tris（PH 8.0-9.0），漩渦震蕩30s，充分懸浮后，12000g離心5min。棄上清，對樣品裂解處理，方法見(jiàn)樣品裂解處理步驟。
   注意：加入裂解液后，充分研磨可以明顯增加DNA的釋放。
   3、粉狀：
以小麥粉為例，直接加入固體5-10倍體積的裂解液A（20-50ul），混合后70℃溫育10min，然后加入等體積的B液（20-50ul），取含有轉基因DNA的裂解液加入PCR反應體系作為模板。
   4、顆?；驂K狀：
以大豆為例，先搗碎樣品，加入裂解液A，研磨至粉糊，然后對樣品裂解處理，方法見(jiàn)樣品裂解處理步驟。

Q:樣品裂解處理步驟

A:1、加入5-10倍固體成分體積的裂解液A（20-50ul），70℃處理10min，然后加入等體積的B液（20-50ul），混合后取含有轉基因DNA的裂解液加入PCR反應體系作為模板，剩余樣品可以在-20℃儲存；
  2、裂解液食品樣本來(lái)源復雜，預處理方法因樣本而異，部分難處理樣品請垂詢(xún)

Q:反應體系

A:以40ul體系示例（20-50ul/reaction），在微量離心管中加入以下各種成分

Q:如何確定PCR模板量

A:食品樣品來(lái)源、形態(tài)和加工方法的不同，造成處理完的裂解液成分和模板數目千差萬(wàn)別。多數情況下，上述方法處理完的樣品，取1ul（4%總反應體積）作為PCR模板即可；第一次試驗，建議采用梯度的方法確定最佳處理液和PCR的模板加樣量。

Q:PCR反應參數設置

A:依據擴增產(chǎn)物而定，以1kb的擴增產(chǎn)物為例：94℃  4min，35 cycles（94℃ 30 sec，55℃ 30 sec，72℃ 1 min），72℃ 5 min，4℃ 保溫。

Q:片段大?。?kb

A:擴增1kb以下片段，30 sec延伸即可；可用兩步擴增法（引物長(cháng)度22-25bp，68℃退火延伸）