Q:貼壁細胞樣品準備

A:吸棄細胞培養液，胰酶消化吹打細胞，制備單細胞懸液，1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細胞。

Q:懸浮細胞樣品準備

A:1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細胞

Q:組織細胞樣品準備

A:將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰酶消化0.5-1個(gè)小時(shí)。經(jīng)過(guò)200-400目篩網(wǎng)過(guò)濾得到單細胞懸液。1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細胞。

Q:細胞如何收集

A:我們推薦用6孔板或者6cm dish，收集細胞時(shí)全部收集，以防止實(shí)驗誤差

Q:細胞如何固定

A:細胞沉淀用1ml預冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2個(gè)小時(shí)以上或者過(guò)夜。接下來(lái)1000g離心5分鐘沉淀細胞后，用1ml預冷的PBS重懸。然后再次1000g離心5分鐘沉淀細胞。

Q:碘化丙啶染色液配置

A:1ml染色緩沖液中加入25ul碘化丙啶儲液和20ul RNase A，混勻待用。

Q:每個(gè)細胞樣品加入多少染色液

A:每個(gè)細胞樣品加入0.5ml配置好的碘化丙啶染色液，輕輕混勻重懸細胞。

Q:孵育多長(cháng)時(shí)間

A:37℃，避光溫浴30分鐘

Q:多長(cháng)時(shí)間內上流式細胞儀檢測

A:上流式細胞儀檢測（5小時(shí)內完成為佳）。

Q:檢測參數

A:激發(fā)波長(cháng)為488nm，檢測紅色熒光。

Q:配置好的碘化丙啶染色液保存溫度，最長(cháng)可以保存多久

A:配置好的PI染色液4℃保存1個(gè)星期。-20℃保存1個(gè)月。避免反復凍融

Q:如何保存

A:在-20℃，避光條件下，保存1年以上。0-5℃，避光條件下，可以保存2個(gè)月。

Q:自備試劑

A:PBS；70%乙醇

Q:是否需要加細胞打孔的東西

A:說(shuō)明書(shū)中標明需客戶(hù)自備的70%乙醇，就有細胞打孔的作用。70%的乙醇具有固定和打孔的作用 無(wú)需再另外準備其他打孔的東西

Q:是否避光

A:碘化丙啶存在淬滅現象，保存和使用過(guò)程中注意避光

Q:通常進(jìn)行細胞周期試驗的時(shí)候藥物都作用多久

A:細胞周期實(shí)驗時(shí)，PI孵育細胞一段時(shí)間后，盡快流式檢測。時(shí)間過(guò)長(cháng)，會(huì )造成染色過(guò)度或者細胞破碎等情況，造成實(shí)驗誤差。

Q:在流式細胞儀檢測成纖維細胞S期細胞比例的情況，是否可用周期試劑盒

A:可用，只要是能處理成單細胞懸液，都可以用周期試劑盒

Q:試劑盒本身有無(wú)紅色？實(shí)驗過(guò)程中染不上色原因？如何解決？

A:試劑盒中應該有紅色的PI，也許是試劑盒中的PI已經(jīng)失效，建議避光保存

Q:希望G0期和G1期能夠分開(kāi)看結果，檢測中比重，如何做？

A:所有的PI染色周期試劑盒都不能區分G0和G1期。分不開(kāi)  G0和G1期，染色體都是單倍，PI染色一樣，無(wú)法區別。