Q:適用實(shí)驗

A:可以廣泛用于ELISA、Western Blotting、免疫組化等實(shí)驗，用以特異性檢測6*His標簽。

Q:NTA-HRP是不是就是his標簽抗體

A:是的，區別在于它相當于His-HRP，無(wú)需二抗，一步完成。

Q:濃度

A:1mg/ml，含50%甘油（PBS）

Q:推薦Western Blot稀釋比例

A:1:100-2000稀釋

Q:推薦Elisa稀釋比例

A:1:1000-10000稀釋

Q:推薦免疫組化稀釋比例

A:1:100-2000稀釋

Q:封閉液

A:封閉液應該選用1%BSA/TBST緩沖液，避免用牛奶

Q:緩沖液成分

A:應該避免EDTA、咪唑或者其他二價(jià)金屬離子

Q:需去除膜上的NTA-HRP

A:在WB實(shí)驗中，如果需要去除膜上的NTA-HRP，只需要把浸入100mM咪唑，震蕩洗滌30min，然后用緩沖液洗滌即可。

Q:為什么要避免EDTA

A:避免和EDTA等金屬螯合劑共同使用，這類(lèi)試劑會(huì )螯合Ni-NTA中的鎳離子，影響NTA和6*His的結合

Q:緩沖液是否可含咪唑

A:咪唑同樣會(huì )和鎳離子結合，緩沖液中含有咪唑會(huì )影響NTA和6*His的結合

Q:信號沒(méi)有或者太弱

A:1、6*His沒(méi)有充分暴露，WB可以在轉膜后用巰基乙醇和6M尿素處理膜，然后在加NTA-HRP，Elisa可以在包板前，先對蛋白加入巰基乙醇后加熱處理；

   2、目標蛋白或者NTA-HRP量太少，應增加用量，延長(cháng)反應和曝光時(shí)間

Q:背景太高

A:1、封閉不徹底；

   2、目標蛋白或者NTA-HRP量太多

Q:雜帶

A:1、WB高分子量雜帶，處理樣品不徹底，應該加入DTT并煮沸處理；

   2、目標降解產(chǎn)生低分子量雜帶