Q:原理

A:通過(guò)和帶負電荷的DNA非共價(jià)結合形成納米聚合物，從而將DNA轉染進(jìn)入真核細胞。

Q:適用細胞

A:對貼壁細胞和懸浮細胞的瞬時(shí)轉染或穩定轉染均有效

Q:轉染前24孔板內培養細胞，數量如何確定（細胞培養以24孔板為例，其他培養板或培養皿參考24孔板進(jìn)行操作）

A:在轉染前一天（20-24小時(shí)）把約20-50萬(wàn)細胞（具體的細胞數量據細胞大小和細胞生長(cháng)速度而定）培養到24孔板內，使第二天細胞能達到約50-60%滿(mǎn)。

Q:轉染試劑推薦用量

A:預熱培養基至室溫，取25ul細胞培養液入一無(wú)菌離心管中（如OPTI-MEM、DMEM、RPMI1640等），加入1.5ul TransAid 2000轉染試劑，輕輕搖勻。

Q:DNA用量

A:取25ul細胞培養液入另一無(wú)菌離心管中，再加入1ug DNA，混勻。

Q:TransAid 2000-DNA混合物

A:把以上轉染試劑緩慢、逐滴加入以上DNA溶液中，用移液器上下抽吸或者Vortex混勻，室溫靜置20min。

Q:最佳復合物形成溫度

A:在混合前，確保轉染試劑盒DNA溶液都已混合均勻，推薦20-35℃為最佳復合物形成溫度。

Q:基因表達

A:對于基因表達，再培養24-40小時(shí)候即可檢測轉染效果

Q:篩選穩定表達細胞株

A:如果用于篩選穩定表達細胞株，則在轉染后24-40小時(shí)即可加入適當的篩選藥物，例如G418等，進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選。

Q:是否需要更換培養液

A:轉染后不更換細胞培養液對大多數細胞無(wú)明顯毒性、不影響轉染效率，但是隔夜更換培養液對一些細胞（如干細胞）可以提高轉染效率。

Q:轉染效果不夠好，有無(wú)建議

A:在TransAid 2000的使用中，遇到轉染效果不夠好的問(wèn)題時(shí)，如果參照以下的方法，會(huì )有意向不到的效果：

  1、Q:轉染后細胞狀態(tài)不好時(shí)

        A:a、提高細胞的豐度（80%-90%）；
           b、按比例減少DNA和TransAid 2000的用量（以24孔板為例，調整比例為0.5ug DNA：1ul TransAid 2000）；

  2、Q:某些難轉染的細胞

        A:改變孵育方法，包括：
           a、改變孵育的程序：質(zhì)粒和TransAid 2000共同加到一個(gè)管一起孵育20分鐘（以24孔板為例，在100ul培養基里，先加入DNA，混勻后，直接加入TransAid 2000后充分混勻）；
           b、改變孵育溫度：多數情況下，室溫孵育就會(huì )有好結果，但是對于某些難轉染的細胞，在37℃孵育，轉染效率會(huì )提高30-50%。
           c、延長(cháng)轉染時(shí)間：一般24小時(shí)內，轉染就會(huì )完成，但是有時(shí)蛋白表達不明顯（例如示蹤的GFP的表達），這時(shí)可以換新鮮的培養基，繼續培養24小時(shí)，轉染效果從蛋白表達上看，會(huì )非常明顯。以Hela細胞為例，采用1ug DNA：2.5ul TransAid 2000，室溫孵育20min，24小時(shí)換液，48小時(shí)候觀(guān)察，75%以上的細胞為轉染陽(yáng)性。

Q:含血清或無(wú)血清的培養基是否可直接加入進(jìn)行轉染

A:須無(wú)血清培養基

Q:質(zhì)粒DNA, DNA, siRNA是否均可轉染？

A:均可轉染

Q:轉染條件優(yōu)化

A:對于24孔板中一個(gè)孔的細胞，TransAid 2000的用量可以在1-5ul內進(jìn)行適當調節，DNA用量可以在0.5-2ug的范圍內進(jìn)行適當調節。最佳的轉染條件，因具體的細胞和培養條件而定，可以在上述推薦范圍內自行優(yōu)化轉染條件。

Q:如若不是24孔板，試劑用量怎么定？

A:對于其他培養板或培養器皿，各種試劑的用量可以按照細胞培養面積按比例進(jìn)行換算。詳見(jiàn)下表

上表中給出的DNA和TransAid 2000的參數均是由pEGFP-N1轉染293T、CH0、NIH-3T3、HeLa、HepG2以及COS-7得出的數值，若轉染其他細胞系可對DNA和TransAid 2000的用量、細胞密度及轉染時(shí)間等進(jìn)行優(yōu)化。對于難以轉染的細胞，同時(shí)建議用TransAid2000 Plus代替TransAid 2000.

Q:TransAid 2000轉染試劑是脂質(zhì)體還是非脂質(zhì)體

A:非脂質(zhì)體